Russian Journal of Developmental BiologyRussian Journal of Developmental Biology0475-14503034-6266Russian Academy of Science10.31857/S0475145023010068Generation of an Induced Pluripotent Stem Cell Line, ICGi042-A, by Reprogramming Peripheral Blood Mononuclear Cells from Parkinson’s Disease Patient with c.1000G>A Mutation in LRRK2 GeneСоздание линии индуцированных плюрипотентных стволовых клеток ICGi042-A с помощью репрограммирования мононуклеарных клеток периферической крови пациента с болезнью Паркинсона, ассоциированной с генетическим вариантом c.1000G>A в гене LRRK2Grigor’evaE. V.ГригорьеваЕ. В. evlena@bionet.nsc.ruФГБНУ “Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук”; ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр имени академика Е.Н. Мешалкина Министерства здравоохранения Российской ФедерациInstitute of Cytology and Genetics, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences; Meshalkin National Medical Research Center, Ministry of Health of the Russian Federation; Institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Siberian Branch of th010120235418795

The search for new polymorphisms associated with hereditary diseases is important for diagnostics and the study of the disease development pathology. We have analyzed clinical exome of a Parkinson’s disease patient and identified single-nucleotide variations in the LRRK2 (c.1000G>A, c.2167A>G) and PINK1 (c.1562A>C) genes. The LRRK2:c.1000G>A mutation has uncertain clinical significance, and is interesting for further investigation. We generated induced pluripotent stem cells (IPSCs) from PBMCs of the patient by a non-integrating episomal vectors. IPSCs demonstrate typical morphology and normal karyotype (46,XY), express pluripotency markers (OCT4, SOX2, NANOG, SSEA4, TRA-1-60), and are able to produce derivatives of three germ layers.

Поиск новых полиморфизмов, связанных с наследственными заболеваниями, важен для диагностики и изучения патологии развития болезни. Мы проанализировали клинический экзом пациента с болезнью Паркинсона и выявили полиморфизмы в генах LRRK2 (c.1000G>A, c.2167A>G) и PINK1 (c.1562A>C). Генетический вариант LRRK2:c.1000G>A имеет неопределенное клиническое значение и представляет интерес для дальнейшего изучения. Мы создали индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) из мононуклеарных клеток периферической крови пациента с помощью неинтегрирующихся эписомных векторов. ИПСК (линия ICGi042-A) демонстрируют типичную морфологию и нормальный кариотип (46,XY), экспрессируют маркеры плюрипотентности (OCT4, SOX2, NANOG, SSEA4, TRA-1-60) и способны продуцировать производные трех зародышевых листков.

болезнь Паркинсона индуцированные плюрипотентные стволовые клетки полиморфизмы репрограммированиеболезнь Паркинсона индуцированные плюрипотентные стволовые клетки полиморфизмы репрограммированиеИммунофлуоресцентную визуализацию проводили с использованием ресурсов Центра коллективного пользования микроскопического анализа биологических объектов ИЦГ СО РАН (https://ckp.icgen.ru/ckpmabo/), поддержанного Бюджетным проектом ИЦиГ СО РАН FWNR-2022-0015.Иммунофлуоресцентную визуализацию проводили с использованием ресурсов Центра коллективного пользования микроскопического анализа биологических объектов ИЦГ СО РАН (https://ckp.icgen.ru/ckpmabo/), поддержанного Бюджетным проектом ИЦиГ СО РАН FWNR-2022-0015.Choppa P.C., Vojdani A., Tagle C. et al. Multiplex PCR for the detection of Mycoplasma fermentans, M. hominis and M. penetrans in cell cultures and blood samples of patients with chronic fatigue syndrome // Mol. Cell Probes. 1998. V. 12. № 5. P. 301–308.Cowan C.A., Klimanskaya I., McMahon J. et al. Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts // N. Engl. J. Med. 2004. V. 350. № 13. P. 1353–1356.Grigor’eva E.V., Malankhanova T.B., Surumbayeva A. et al. Generation of GABAergic striatal neurons by a novel iPSC differentiation protocol enabling scalability and cryopreservation of progenitor cells // Cytotechnology. 2020. V. 72. № 5. P. 649–663.Grigor’eva E.V., Kopytova A.E., Yarkova E.S., Pavlova S.V., Sorogina D.A., Malakhova A.A., Malankhanova T.B., Baydakova G.V., Zakharova E.Y., Medvedev S.P., Pchelina S.N., Zakian S.M. Biochemical characteristics of iPSC-derived dopaminergic neurons from N370S GBA variant carriers with and without Parkinson's disease // Int. J. Mol. Sci. 2023. 24(5). 4437. https://doi.org/10.3390/ijms24054437Okita K., Yamakawa T., Matsumura Y. et al. An efficient nonviral method to generate integration-free human-induced pluripotent stem cells from cord blood and peripheral blood cells // Stem Cells. 2013. V. 31. № 3. P. 458–466.